(1)质粒上的两个标记基因中均有限制酶Ⅰ(-↓GATC-)的识别序列和切点,若用该酶切割会导致两个抗性基因均被破坏,因此应用限制酶Ⅱ切割质粒;目的基因可以用限制酶Ⅰ或两种酶一起切割,由于两种切割形成的末端序列相同,因此可以连接.①表示基因表达载体的构建过程,该过程在生物体外进行.
(2)用限制酶Ⅱ切割质粒时,破坏了质粒中的氨苄青霉素抗性基因,但没有破坏四环素抗性基因,所以可以含有四环素的培养基来进行筛选.
(3)由于大肠杆菌的繁殖快,周期短,因此将重组质粒导入大肠杆菌可以扩增目的基因.
(4)将目的基因导入微生物细胞时,常采用感受态细胞法,即用氯化钙溶液处理细菌细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使之成为容易吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞.
(5)要将转基因细胞培养成转基因植株,需要采用植物组织培养技术,该技术的原理是细胞具有全能性,而细胞具有全能性的原因细胞中含有发育成完整个体的全部遗传物质.
(6)此目的基因在根细胞内成功表达的标志是形成目的基因产物.
故答案为:
(1)ⅡⅠ(Ⅱ和Ⅰ) 体外
(2)四环素
(3)大量复制目的基因
(4)氯化钙溶液 以增大细菌细胞壁的通透性
(5)植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质
(6)形成目的基因产物