如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?

2025-04-14 15:40:11
推荐回答(3个)
回答1:

首先,去除菌体和残余的发酵液,一般高速离心就可以,5000r/min离心1min.取上清。此部要根据蛋白质的特点来做。若果蛋白酶是在细胞内那么要先破碎细胞,如果该酶的分子量过大,那么要减小离心转速。
其次,蛋白酶溶液中根据酶的性质,处理纯化或提取。常用方法是有机溶剂提取法,阴、阳离子交换柱层析发,液相色谱法等。这要根据蛋白质的性质,是否带电荷带什么电荷等。

关于酶活,应该每一步都要测定酶活,可用该酶分解蛋白质的特点,看一定的酶量在单位时间里分解蛋白的量,如果有特殊吸收峰的话可用紫外分光光度计测吸光度。

表达量,一般定量表达,常用方法是基因水平Realtime-PCR,蛋白水平,westen-blot法。也可参考其他相关文献的方法。

回答2:

首先,你必须确定目标蛋白的表达在细胞外或细胞内的细胞外,通过离心收集发酵液中收集细胞,细胞内细菌破碎的物理和化学方法,如冻 - 融,机械破碎,使用溶菌酶。后纯化所需的色谱。

回答3:

首先要分离这个蛋白酶,这个你要了解该蛋白的性质,