1你要知道第一个问题的答案,你其实只要知道质粒这东西在实验室中是直接从细菌中提出来以后在参于在基因工程的实验中去的。
2作为载体以后~这个质粒我们称之为重组质粒,我们在基因工程里面只是把质粒整个的导入到细胞里面。而不是把质粒整合到受体细胞的DNA上。
3复制原点在我们书本上说是转录或者复制的起始点,没有他就没办法开始转录或者复制。而启动子是对其进行激活用的。事实如果你要分清楚他们的情况那你只要知道一点先由启动子启动,然后才能经过复制原点开始。如果还不明白打个比方,启动子好象口令。而复制原地好象是带队大哥。听到口令事头大哥不走后面的小兵是没办法走的。
4你整清楚基因探针的原理你就明白了~其实基因探针也就是用来测目的基因的,但是我们要检测受体细胞是不产生了标记基因的产生物你是不能用探针来整的。探针只能整有目的基因的存在,不能整是否表达。
我来回答你前两个问题
1、目的基因放在质粒上,是在体外进行操作。如何操作?首先需要质粒,可以直接购买,也可以从含有目的质粒的细菌中提取;其次是目的基因,需要在目的基因的上、下游加入不同的酶切位点(这两个酶切位点要求质粒上含有,而且是唯一的),通过一定方法(PCR等)获得目的基因;然后就是在限制性内切酶适宜的条件下,对目的基因和质粒进行双酶切,这样,目的基因和质粒会被切出相同的黏性末端(也可以使平端);最后,在连接酶的作用下以及适宜的条件下,被切开的目的片段和质粒会特异性的结合。这样,就是把“目的基因放到质粒上”了。
2、作为载体的质粒导入到受体细胞,是将整个质粒导入的,这个质粒可以是一个完整的质粒,也可以是含有目的基因的重组质粒。但是质粒不是装到DNA上,因为质粒是独立于细菌组DNA存在的可以单独复制的单位,它与细胞内的DNA在空间上是独立存在的。
我已经尽量把问题解释清楚,其中可能有些不准确,也可能有些你会觉得不清楚,希望多看看相关书籍,争取做些相关试验,这样理解会透彻些。希望能给你解惑的同时又不会给你带来误导!
1、在细胞外,或者说在试管中;2、在受体细胞中重组质粒独立存在;3、复制原点是开始DNA复制过程,启动子是开始转录过程;4、当然可以,但是,通过检测受体细胞是否产生了标记基因的表达产物来判断重组质粒是否成功导入受体细胞,比基因探针方便。
1 细胞外,限制性内切酶进行剪切拼接
2 质粒DNA进入感受态细胞,在细胞内翻译蛋白
3 启动子在复制原点之前的一段