肿瘤标志物检测中CYFR21－1的含义

细胞角蛋白19片段(CYFR21-1)
近年来随着分子生物学技术的不断发展，肿瘤标记物方面的研究相当活跃，在临床上，已被广泛应用于肿瘤的诊断、评估疗效、监测复发和推测预后。本文就这方面的应用及进展综述如下。

1 单一检测

1.1 细胞角蛋白19片段：细胞角蛋白19段(CYFRA21-1)是采用夹心酶联免疫吸附法，联合应用两种特异性单克隆抗体(Ks19.1和BM19.21)进行检测血清中的细胞角蛋白19片段。细胞角蛋白是细胞体的中间丝，根据其分子量和双向二维电泳中等电点的不同，可以分为20种不同类型。其中，CYFRA21-1在肺癌中含量尤其丰富。

1994年Koga等[1]采用放射免疫分析技术检测137例肺癌患者的血清，CYFR21-1的浓度阈值为2.2ng/ml，其敏感性、特异性及准确性分别为57.7%、91.9%及64.9%。血清CYFR21-1浓度及敏感性随病情进展而升高。从组织学角度来看，CYFRA21-1对鳞癌的敏感性(76.5%)较腺癌(47.8%)和SCLC(42.1%)显著高(P<0.01，P<0.05)，对鳞癌Ⅰ～Ⅳ期患者的敏感性分别为60.0%、88.8%、80.0%及100%。与CEA(45.3%)、鳞状细胞抗原(squa-mous cell carcinoma antigen SCC，22.6%)相比，CYFRA21-1对肺癌(不分组织学类型)的敏感性最高(57.7%，P<0.05，P<0.01)。对鳞癌而言，CYFRA21-1的敏感性显著高于SCC(47.1%，P<0.05)，对腺癌而言，CYFRA21-1的敏感性及准确性高达75.4%及78.1%。该研究结果表明，CYFRA21-1有可能代替SCC成为检测肺鳞癌的首选肿瘤标记物。同年Ebert等[2]报道国际多癌症中心研究的结果基本相似。

1.2 粘蛋白1抗原：粘蛋白是粘液的重要组成成份，是一种高分子量的糖蛋白，是一包含许多丝氨酸、苏氨酸和脯氨酸残基的蛋白核心。1993年Willsher等[3]采用酶联免疫吸附法及单克隆抗体技术，测定86例肺癌患者、24例肺良性疾病患者血清及55例肺癌患者、21例肺良性疾病患者支气管灌洗液中MSA(mammary serum antien)，CASA(canecr associated serum antigen)的浓度。结果，血清CASA及MSA敏感性分别为57%、10%，与正常相关的特异性分别为93%、95%，与肺良性疾病相关的特异性分别为63%、92%。血清CASA水平显著高于肺良性疾病患者(P=0.024)，但MSA未显示明显差异(P=0.635)；血清CASA水平与肺癌分期及进展呈正相关；而肺癌患者及肺良性疾病患者支气管灌洗液CASA、MSA测定未显示出明显差异。由于血清CASA在肺癌所有病理类型及分期中均升高，其浓度高低与肺癌分期及进展有关，其敏感性(57%)优于CEA(33%)、CA19.9(51%)和CA125(44%)。所以，CASA对肺癌的早期诊断、病情监测有较高价值，而血清MSA及支气管灌洗液CASA、MSA的测定均无临床意义。

1.3 P53蛋白：P53蛋白是一种由393个氨基酸组成的含磷蛋白，位于细胞核。夏书月等[4]研究发现在癌旁正常和鳞状化生的支气管上皮未见P53蛋白表达，在轻→中→重度不典型增生、原位癌、浸润癌中，P53蛋白表达的阳性率逐渐升高，表明P53基因与肺癌发生有关。

胡云伦等[5]对P53基因的不同类型肿瘤中突变频率检测结果，鳞癌为63.6%，腺癌为65%，发现P53蛋白在不同分化程度肺癌组织之间无显著性差异，但在肺鳞癌组织中随分化程度降低P53表达却增强，认为P53蛋白与肺鳞癌的关系可能较肺腺癌更为密切。而且在肺鳞癌伴有和不伴有淋巴结转移病例中，P53表达无显著性差异，而肺腺癌中伴有与不伴有淋巴结转移者P53表达具有显著性差异，提示P53过度表达与肺腺癌淋巴结转移有关。

1.4 CD44：白细胞分化抗原44(CD44)，作为一种细胞粘附分子包括一个多形性细胞膜糖蛋白家族，在肿瘤浸润、转移中的作用越来越受到重视。关于CD44在肺癌中的表达，以往的研究结果多数显示，CD44主要表达于NSCLC，而在SCLC中不表达[6]，Washimi等[7]则认为CD44在NSCLC、SCLC及正常肺组织中均有表达。Penno等[8]认为，CD44在NSCLC中主要表达于腺癌，而Vimmel等[6]发现鳞癌中CD44表达率最高，赵惠儒等[9]通过对96例肺癌研究表明鳞癌表达高于腺癌，这也与大多数学者观点相符[6，10]。CD44同肺癌预后的关系也是临床上又一研究热点。Penno[8]、Wimmel[6]指出，CD44表达同肺癌临床分期及组织分化程度无关；Tran[10]则认为在低分化NSCLC中，CD44V4、5阳性可能提示有鳞状上皮分化。赵惠儒等[9]发现在比较Ⅰ～Ⅱ期肺癌同Ⅲ～Ⅳ期肺癌时，二者CD44V6表达存在明显差异。从临床实际来看，高TNM分期尤其是Ⅲ～Ⅳ期肺癌，往往伴有高频率的淋巴结转移，因此推测，CD44V6可能会成为一个评价NSCLC、TNM分期的参考指标。

1.5 碳水化合物抗原242：CA242是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原。1993年Pujol等[15]采用迟缓铕镧荧光分析技术测定102例NSCLC患者血清CA242浓度，CA242血清浓度阈值为20.0U/ml，结果其敏感性及特异性分别为28.5%和95.6%。肺鳞癌患者血清CA242水平显著低于非鳞癌(腺癌和大细胞肺癌)患者，发生远处转移者的CA242浓度高于未转移者，且Ⅰ～Ⅳ期浓度逐渐增加。在50例化疗患者中，对化疗无反应患者的CA242浓度显著高于有反应患者。从整体角度看，CA242水平与生存不相关，但是，在不能手术切除的NSCLC患者中，CA242浓度升高患者的生存期较浓度低于20U/ml患者显著短。由于CA242敏感性较低，对NSCLC的诊断无意义。但其浓度水平与NSCLL分期密切相关，且能预测化疗反应，与分期及体力状况比较，对提示预后意义不大。

1.6 谷胱甘肽S转移酶-π：目前一些研究表明，谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)在NSCLC对烷化剂包括铂类化合物产生耐药过程中起重要作用。1994年Hida等[16]首先提出将GST-π作为一种新的NSCLC肿瘤标记物。作者采用夹心酶联免疫法测定121例NSCLC患者血清GST-π浓度，并同时测定CEA、SCC及NSE，GST-π浓度阈值为34.8ng/ml。结果，50例(41.3%)患者血清GST-π浓度高于阈值，其敏感性高于CEA(37.2%)，SCC(15.7%)及NSE(14.9%)。经化疗部分缓解者的治疗前平均血清GST-π浓度显著低于对化疗无反应者。治疗前血清GST-π浓度高于阈值患者对含铂联合化疗方案的有效率仅为13.8%(4/29)，而低者部分缓解率为40.0%，两者有显著性差异(P<0.02)。研究表明，GST-π可作为检测NSCLC的肿瘤标记物，其治疗前血清浓度水平能作为预测对含铂联合化疗方案化疗反应的一项参考指标。

1.7 ABH血型抗原：ABH血型抗原(ABH blood group antigen)是细胞表面碳水化合物抗原，广泛分布于人表皮细胞及内皮细胞上。在肿瘤形成过程中，ABH血型抗原减少或消失。1993年Matsumoto等[14]采用免疫组化染色法研究89例肺癌患者肿瘤组织及周围邻近正常组织的ABH血型抗原表达情况，结果发现ABH血型抗原的消失与肺癌发生转移，尤其是血行转移有关。因此，肿瘤组织ABH血型抗原阳性的肺瘤患者其预后较ABH血型抗原阴性者好。其中，B型抗原消失对血行转移及预后的影响较A型、H型更为显著。目前认为ABH血型抗原对提示肺癌转移和预后有一定价值。

1.8 Ha-ras癌基因产物-p21蛋白：研究表明癌基因的活化在人类恶性肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用。Ha-ras癌基因是ras癌基因家庭中的一种，其表达产物Ha-rasp21位于细胞膜的胞浆侧，对传递细胞增殖信号起关键作用。fes癌基因是生长因子受体类癌基因的一种，其表达产物fesp85代表酪氨酸激酶的活性。1992年Nishio等[15]采用免疫组化技术及单克隆抗体研究147例肺癌患者肿瘤组织中Ha-ras，fes癌基因的表达，结果80.5%的腺癌患者、39.5%的鳞癌患者、21.4%的大细胞肺癌患者及15.4%的SCLC患者fesp85阳性。与其它组织类型相比，肺腺癌的Ha-ras基因及fes基因表达更显著。在分化较好或中等分化的肺腺癌中，Ha-ras在预后差患者中表达显著高于预后较好的患者。目前认为，Ha-rasp 21可能是提示肺腺癌患者预后的一个有用标记物。

1.9 原癌基因bcl-2蛋白：bcl-2蛋白是原癌基因bcl-2编码的一种能调节细胞死亡而不影响细胞增殖的蛋白质，1993年Pezzella等[16]研究bcl-2在NSCLC患者中的表达与预后之间的关系。该实验采用bcl-2特异性单克隆抗体及免疫组化染色测定80例肺鳞癌及42例肺腺癌患者肿瘤组织中bcl-2蛋白。结果25%(20/80)的鳞癌患者及12%(5/42)的腺癌患者bcl-2蛋白阳性，在邻近的正常呼吸道上皮中，bcl-2蛋白仅存在于基底细胞。bcl-2蛋白阳性患者的5年生存率高于阴性患者(P<0.1)，年龄为60岁或60岁以上bcl-2蛋白阳性患者的预后最好(P<0.02)。该研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中发生异常表达，其表达与预后有一定关系。

1.10 神经细胞粘附分子：神经细胞粘附分子(NCAM)是膜结合粘蛋白的一个家族。1993年Japues等[1]报道检测血清NCAM浓度对SCLC的临床意义，并与NSE进行了比较。该试验采用酶联免疫吸附法及单克隆抗体Mab735，NCAM Mab抗体检测221例SCLC患者、28例NSCLC患者血清NCAM水平，NCAM血清浓度阈值为20U/ml。结果51%(113/112)的SCLC患者NCAM水平高于20U/ml，34%(75/221)SCLC患者NSE水平高于25ng/ml。两种肿瘤标记物的血清水平在局限期患者及晚期患者中均有显著差异。血清NCAM浓度>20U/ml或NSE浓度>25ng/ml患者的生存期显著短于低于该水平的患者，治疗前NES，NCAM浓度呈正相关(n=221，r=0.60)。在跟踪监测的19例SCLCA患者中发现，当治疗有效时，NCAM及NSE水平均降至正常，而当肿瘤复发时，其水平均又升高。由此可见，NCAM对SCLC的诊断、预后和监测治疗均有一定意义。

1.11 神经特异烯醇化酶NSE：NSE是由两个γ亚单位组成的糖酵解酶，存在于正常神经细胞和神经内分泌细胞内。肺癌组织中NSE含量是正常肺组织的3～35倍。Plebani[11]认为，不同组织类型的肺癌癌组织和血清中NSE含量依次为SCLC、大细胞癌、鳞癌、腺癌。因此，可认为NSE是SCLC的特异标记物。

2 联合检测

2.1 NSE+CEA+CD50：Bergman等[18]研究联合检测血清中NSE、CEA、CA50(Carbohgdrate antigen 50)水平对肺癌诊断的临床意义，该试验检测168例患者、102例肺良性疾病患者的血清NSE、CEA、CA50水平。其阳性标准为：0.037NSE+0.053CEA+0.011CA50>1。结果三种标记物联合检测多变量分析结果表明，肺癌阳性预测 率为95%，其诊断敏感性为57%。该研究结果表明，NSE、CEA、CA50联合检测对肺癌辅助诊断有较大意 义。

2.2 CYFRA21-1+CA19-9，CYFRA21-1+TPA：王耀等[19]对97例肺癌联合检测CYFRA21-1和CA19-9(胃肠道癌抗原)，发现当CYFRA21-1以3.9μg/L为临界值与CA19-9组合对肺癌诊断有更高特异性，达96%，此时的敏感性为76%。此外，Stieber等[20]联合检测CYFRA21-1+TPA(肿瘤多肽抗原)显示可提高大细胞肺癌的敏感性。

2.3 齐法莲等[21]对肺癌患者进行七项血清学指标观察，采用ELISA、IRMA和RIA法对肺癌组(273例)，慢性支气管炎CAB(179例)。正常对照组(193例)进行血清中层粘连蛋白(LN)，可溶性E-选择素(SE-SLT)，CA242，透明质酸HA，NSE，CEA及酸性铁蛋白AIF七项指标的含量测定显示，肺癌组和慢性支气管炎组LN、SE-SLT、HA、CEA的含量与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01或P<0.05)，肺癌组Ⅲ～Ⅳ与Ⅱ期比较含量明显升高；肺癌组与CAB组比较，LN、SE-SLT无显著的差异，P>0.05，CAB组CEA和HA含量明显高于正常对照(P<0.01)但与肺癌组比较则明显降低(P<0.01)，提示LN、SE-SLT含量变化仅与患者的病情变化严重程度密切相关，HA和CEA则不仅与病情进展有关，而且在鉴别良恶性疾病方面具有重要意义。肺癌组CA242NSE、AIF含量与正常对照组比较明显升高(P<0.01)，而CAB与正常对照组比较则无显著的差异(P>0.05)，从而进一步证明CA242、NSE、AIF可作为肺癌实验诊断的较好标记物。

2.4 陈书盘等[22]对85例肺癌和胸部良性疾病患者的血清脂质结合唾液酸LSA，唾液酸总量TSA和a1-抗胰蛋白酶AAT同时进行检测，并采用相对操作特征分析和多元差别分析进行客观评价，单项检测的界定值以使试验产生95%以上的阳性预测值(PPV)的最低标记物浓度确定之。研究发现在特异性为95%时，LSA、TSA和AAT相应的界定值为31.6、100、4和495ml/dl，灵敏度分别为66.6%、53.3%、3%和26.7%，其PPV分别为90.9%、84.2%和88.9%，均小于确诊肺癌所需的95%。然而在PPV≥95%时，单项试验的灵敏度均相应下降。而通过联合检测30例肺癌者有6例假阳性，55例胸部良性疾病仅1例假阳性，准确率为91.8%，灵敏度达80%，显著高于单项试验(P<0.01)，特异性90%，表明联合检测这些标志物能最大限度地利用单项标志物之间彼此协调互补的特性，从而为确诊肺癌提供重要依据。