一抗,二抗如何选择?

2025-04-01 06:39:53
推荐回答(2个)
回答1:

如果一抗为多克隆抗体,由于多克隆抗体主要是IgG类,因此相应的二抗应该选择抗IgG抗体。

对于一抗为单克隆抗体的情况,其同型(Isotype)通常会在产品信息中给出,如果你的一抗同型是小鼠IgM(Isotype:IgM),那么相应的二抗就应该选择抗小鼠IgM。

此外由于抗IgG抗体可以识别大多数类型的免疫球蛋白,所以在不清楚一抗同型的情况下,可以选择抗IgG的二抗。

如果单克隆一抗为小鼠IgG的某一亚类,那么除了选择抗IgG的二抗外,还可以选择针对该亚类的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。如一抗同型为小鼠IgG1,那么可以选择抗IgG二抗或抗IgG1二抗。

扩展资料:

注意事项:

1、一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),荧光基团(FITC,RRX,TR,PE)和生物素。

2、对于westernblot和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗,而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用biotin/avidin检测系统。

3、亲和层析纯化的抗体一般更受用户欢迎,因为这些产品的纯度最高,产生的非特异性背景最少。但是有些情况下也要考虑到纯化过程中损失的IgG部分,因为其中含有亲和力很高的抗体,尤其是当目的抗原存在的量很小的时候,高亲和性的IgG部分就显得尤为重要。

参考资料来源:百度百科-一抗二抗

回答2:

虽然是鸡的细胞,但根据中心法则知道,蛋白质的序列信息来自于基因,而你要看的这个基因是猪的序列,所以蛋白质也是猪的序列,因此要使用抗猪的一抗,譬如鼠抗猪,或兔抗猪等等,而二抗则要根据一抗进行选择,一抗用了鼠抗,那么尔康就要用抗鼠的,譬如羊抗鼠;一抗用了兔抗,二抗就要用抗兔的,譬如羊抗兔,而二抗一般都有商品化的试剂,都是IgG,结合的是一抗的Fc段,在购买时必须看清楚是secondary antibody. 你明白了么?

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