用孢子分离法来复壮平菇菌株的技术规程是什么？

平菇是我国最常见的大宗食用菌品种。但菌种的质量问题一直是影响菇农栽培效益的潜在因素。一般一个表现优良的菌株连续栽培4年后，会不同程度地表现出出菇迟、长势弱、产量不高、抗杂抗逆能力减弱等退化现象。大家通常用组织分离等无性繁殖的手段来进行复壮，虽然简单，但效果往往不理想。用孢子分离法来复壮菌株才是解决种性退化的有效途径，但菇农朋友对该技术知之甚少。现简述如下：

（1）种菇选择

选择形态端正、生长健壮，能代表该品种优良性状的头潮子实体为种菇，并当种菇成熟、菌盖达7～9厘米且边缘稍卷或平展时采摘。

（2）装置与灭菌

在无菌操作条件下，准备3个1000毫升烧杯和3个9厘米培养皿，用0.2%新洁尔灭清洗干净，将培养皿放入烧杯底部。用75%酒精药棉将种菇表面轻擦后，菌褶朝下放入烧杯中的培养皿中，如有插菇钢丝架更好。用无菌水滴湿的4层无菌纱布盖在烧杯口上，再覆一层白纸，用皮筋扎紧后，移入接种箱。在接种箱中另放入30～40支PDA斜面试管培养基、接种铲、镊子、酒精灯等工具，用甲醛或克霉王熏蒸灭菌。

（3）接种与培养

放入接种箱的种菇在8～12小时后就有大量孢子弹射，产生一层灰白色的孢子印，这时要及时接种。双手用酒精等消毒剂擦洗，先将接种铲在酒精灯上灼烧灭菌、冷却，用镊子夹出种菇，取出培养皿，左手食、拇指夹住皿体，再取1支试管用小指和无名指夹住。右手食、拇指持接种铲，小指及无名指拔出试管棉塞，用接种铲从培养皿中央铲取孢子接在试管培养基中央，随即塞上棉塞，贴好标签，置于25℃左右的恒温箱中培养。一朵种菇产生的孢子可接试管种20支。培养后3～4天为孢子萌发定植期，外表看不出任何变化；7天后孢子开始萌发，四周长出白色绒毛状菌丝体；16天左右菌丝布满培养基，即得一代纯菌丝母种。如有污染管应及时弃除。

（4）母种扩大与原种转接

认真比较培养好的一代母种，选取长势、长速、长相最佳的几支（其余淘汰），挑取前端最整齐粗壮的部位，转入新的试管，一般一代母种扩大10支左右。二代母种培养成功，再选择一次后，一部分用于保藏，另一部分进行原种转接。一支母种接5瓶原种，菌丝满瓶后10天左右进行出菇试验。

（5）出菇试验

用普通培养基配方进行代料栽培，一般要搞20～50袋。接种后在适宜条件下发菌，菌丝满袋并经后熟期后，按预定方案分小区进行出菇试验。整个发菌、出菇过程要按连续观测的方法，对复壮菌株的吃料能力、发菌速度、出菇快慢、抗杂抗逆能力及朵形、潮次、产量、质量等指标进行严格测定，达到预期水平后，方可投入生产。