求助,流式细胞仪检测多抗原前准备

2025-04-04 23:27:17
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回答1:

同时检测多个抗原,就需要多种抗体。我来简单说一下注意事项:

  1. 事先要尽量搞清楚多个抗原在同一细胞上的相对表达量,例如哪个是表达最强的,哪个是表达最弱的,哪些是中等的。

  2. 查找市场上有的针对所要检测抗原的荧光标记抗体。最好是把荧光素的强度和抗原表达量配对为反向。比如要检测三个抗原A, B,C, A的表达量最高,就尽量选标记了荧光强度最弱荧光素的抗体,比如Pacific Blue。而表达量最低的抗原,就选荧光强度最高的,比如APC。

  3. 选好抗体后,每个抗体都要测定最佳工作浓度。同样浓度的细胞,用不同量的抗体染色后,上机检测,计算染色指数(stain index),SI最高的那个浓度,就是最佳工作浓度。

4. 每个抗体的最佳工作浓度都确立后,染样本的时候,也要使用同样的细胞浓度来染。

5. 除了要检测的样本外,另外还要准备无染色样本,每个抗体单独染色的阳性样本,作为调节荧光补偿之用。

完成了这些后,就可以去检测你的样本了。