如何对退化的菌种进行复壮？

如果一个菌种因遗传变异而呈现退化，我们是无法通过改变环境条件使其恢复原状的。因此，所谓“复壮”，是指从衰退的群体中找出尚未衰退的少数个体，以达到恢复菌种的优良性状的目的；或通过改变某些内（如菌种的生理状况）、外（如营养成分）因素，使因长期在人工条件（尤其是不适的条件）下培养，生活力和生理机能下降的菌种恢复生活力和正常生理机能的一种措施。

菌种复壮最好在菌种的生产性能尚未衰退之前及时进行，并定期对菌种进行复壮处理，以防衰退。主要通过淘汰已衰退的个体和定期重新分离菌种措施来完成。常有以下几种方法：

（1）纯菌种分离

自然界里，食用菌大都与细菌、霉菌、酵母菌等微生物混杂生活在一起，因此，为了获得纯菌种，就必须进行纯菌种的分离培养。所谓纯菌种分离是指采用无菌操作技术，将食用菌的菌种从混杂的微生物群中单独地分离出来。常用的分离方法有孢子分离法、组织分离法、基内菌丝分离法和土中菌丝分离法。

在自然条件下，菌种的复壮，只有靠产生新一代才能实现，经有性繁殖所产生的孢子，是食用菌生活史的起点，具有丰富的遗传特性。要有计划的把无性繁殖和有性繁殖的方法交替使用，最好每年进行一次组织分离，3年进行一次有性繁殖。新分离的菌种，必须经过试验，性能符合要求后，方能用于生产。

（2）更换培养基

在菌种的培养、保藏、继代过程中，每隔一个时期，注意改变培养基成分（改变、调整、增加某种碳源、氮源或矿质元素等），或在原有的培养基中添加酵母膏、麦芽汁、氨基酸类物质和维生素等，或采用麦粒、谷粒、玉米粒等颗粒菌种，以刺激菌丝生长，提高菌种活力。

（3）适当添加维生素

在高温的夏季，培养双孢菇、凤尾菇等食用菌母种时，在琼脂培养基中加入适量维生素E或维生素B₁，可延缓细胞衰老，而且产量还有增加的趋势。

（4）菌丝液培养

从已退化的菌群中分离出仍保持原菌种典型性状的单个菌体细胞，经生长测定后进行扩大培养，以恢复原菌种的优良性状。具体操作是：在无菌条件下，将试管中菌丝体刮下，放入装有100毫升无菌水的三角瓶中，充分振动摇匀，使菌丝分散，然后用注射器吸取10毫升菌丝液，注入装有90毫升无菌水的三角瓶内，充分摇匀后，接入平板培养基上，每个平板接入2～3滴菌丝液，使菌丝液分散在平板上，在适宜温度下培养使菌丝萌发，从中挑选健壮的菌丝接入斜面试管。等到菌丝长满斜面，经试验证明符合原菌种的性状后，即可用于生产。

（5）尖端菌丝切取复壮

菌丝体的生长点位于菌丝的尖端，取菌丝的尖端旺盛生长点，进行分离培养，以得到优良的菌种。

（6）原基复壮分离法

此法适宜木腐菌的菇类，原基分离能保持母本性状。由于原基形成的物质条件更优越化，因而更易筛选到优良菌株。如用灭菌的尖头镊子在无菌条件下镊取金针菇原基，接入斜面培养基中，恒温培养7～10天。选取菌丝浓密、气生菌丝旺盛的斜面种再转管，生长性状稳定的即为复壮后的分离种。

（7）芽孢复壮

吕作舟、蔡衍山（1992）提出，银耳菌种出耳率下降，可加入芽孢进行复壮。具体做法是：将约500毫升含5克葡萄糖和数滴乳酸灭菌营养液（pH5.5左右），分注入30～40支银耳芽孢试管中，将芽孢菌落洗脱，即得芽孢悬液。芽孢悬液应随配随用，每瓶木屑种加 20毫升芽孢悬液，段木栽培的出耳率可明显提高。

（8）种木分离

袋料栽培的木生菌类，要定期接入木材中，待长出子实体后，挑选菇木或耳木进行种木分离，从而达到复壮作用。