用4%多聚甲醛固定的活体组织还能不能进行RT-PCR检测？

　　答案：与甲醛固定的组织保存的时间有关。个人认为，如果不超过半个月，应该还可以做，太久了可能就不行了。

　　参考文献

　　题目：标本固定对组织总RNA和病毒RNA的影响

　　作者及单位：贺莉萍[1] 蒙艳斌[2] 郭毅[3] [1]湖南湘南学院流行病学与卫生统计学教研室 [2]湖南湘南学院解剖学教研室 [3]武汉大学公共卫生学院流行病学教研室

　　摘要：目的：探讨固定剂、固定时间及温度对RNA病毒感染组织总RNA的完整性、得率及病毒RNA扩增的影响。方法：***略*** 结果：①RNA完整性：与立即冰冻或新鲜组织比较，体积分数为1的甲醇固定24h，RNA完整性损伤不明显；体积分数为0.75的乙醇、体积分数为1的丙酮固定12h后RNA开始出现损伤带，24h出现明显的损伤；而体积分数为0.1的甲醛、4％PFA固定6h就开始出现明显的损伤，固定24h几乎很难看清RNA条带。②RNA得率析因分析结果显示，不同固定剂、固定时间、固定温度下固定的组织中所提RNA的得率差异有显著性（P〈0．01），并有显著性交互作用（P〈0．01）。4℃甲醇固定6h的RNA得率最高，体积分数为0.1的甲醛在室温下固定48h得率最低。③固定后标本巢式RT-PCR，除体积分数为0.1的甲醛固定48h后扩增结果不稳定外，其余各固定方式均能扩增出特异性带。对电泳结果进行灰度扫描时，与甲醛相比，甲醇、乙醇和丙酮固定的标本中扩增的产物电泳条带更亮，灰度值更高（P〈0.01）。结论：①对RNA完整性的保存沉淀脱水类固定剂明显优于醛类固定剂。②对RNA病毒感染组织固定时间不宜偏长，固定过程的温度宜选用4℃。

　　正文：略

　　讨论：文章认为， 4％PFA的pH值为中性，性质比体积分数为0．1的甲醛温和，对核酸的降解和损伤作用小些。所以4％中性多聚甲醛固定后的标本中RNA保存效果比体积分数为0．1的甲醛固定好。
　　如果仅检测形态结构可用4％中性多聚甲醛等醛类固定剂。如不能及时处理或没有冰箱，或标本小而既要用病理检测又要用于核酸分析，则宜选用沉淀类固定剂替代甲醛类固定剂，尤其推荐使用甲醇，即使用醛类固定剂时也应尽量采用中性甲醛。

　　xxhtjmu个人认为，根据作者文献中的数据和结论，结合你的问题，时间是个关键的因素。固定时间越长，RNA降解越多。