考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量应该注意什么⼀

考马斯亮蓝与蛋白质结合是一个很快的过程，约2 min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1 h。之后，蛋白质-染料复合物发生聚合并沉淀出来。一般在反应5min后开始测定。

选用的标准品预先用凯氏定氮法准确测得蛋白纯度，然后根据需要，用NaCl溶液或蒸馏水配制成标准溶液（含标准蛋白100μg/mL）。

最好用去离子水配制试剂。

先将考马斯亮蓝配制成母液（低温下可长期放置），工作液要现用现配。都避光、低温保存。

做标准曲线时，其回归方程的相关系数应达到3个9(即r值至少为0.999)，标准曲线方可用。试剂或仪器更换，一定重新做标准曲线。

测定样品的条件一定要与做标准曲线的条件相一致。

蛋白糖化物对考马斯亮蓝法存在干扰，因此，应用考马斯亮蓝法测定含糖基蛋白的制品时需进一步改进。

去污剂（如 Triton X-100、SDS），Tris，NaOH，植物样品中的酚类、有机酸等，是常见的干扰物。

试验中所需器皿一定要干净、干燥，各试液取量一定要准确。

1．大量的去污剂如TritonX-100、SDS等严重干扰测定。

2．蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合的反应十分迅速，在2min左右反应达到平衡；其结合物在室温下1h内保持稳定。因此测定时，不可放置太长时间，否则将使测定结果偏低。

还有少量去污剂可校正

一楼的 完全正确