如何用流式细胞仪分析荧光强度

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激光激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不相同。每种荧光染料都有特定的激发波长，激发后又产生特定波长荧光。通过一些波长选择通透性滤光片，可将不同波长的散射光、荧光信号区分开。选择不同的单克隆抗体及荧光染料可以利用流式细胞仪同时测定一个细胞上的多个不同特征。

（一）荧光信号测量与放大器

线性放大器用于测量信号强度变化范围较小的信号或具有生物学线性过程的信号，如前向散射光的测量与CD3+细胞DNA指数的测量。

对数放大器用于测量信号强度变化范围较大且其光谱信号较复杂的信号，在免疫测量中最常使用。

（二）荧光补偿

依靠滤光片是不能完全阻挡干扰信号，在每两种荧光的发射光信号中仍有不可避免的重叠现象。该重叠区越大，信号检测的准确性越差。通常采用荧光补偿的方法来消除重叠信号，保证检测信号的准确性。

流式细胞仪都是检测相对荧光强度的。所以第一，一定要有对照。

有几个常用的方法来分析：

1. 先用对照设置好阈值，然后分析各个组超过荧光强度阈值的百分数的变化

2. 如果没有明显的阳性，阴性阈值，可以比较整体的荧光强度的均值，中位数等等，具体采用哪个指标，要看实验目的。