怎样测叶绿素a 以及怎样进行蓝藻计数

2025-02-15 03:53:19

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回答1：

欲知封闭水域会否出现藻类疯长，如蓝藻爆发等现象，应监测水域中的藻类数量以及水质，由于对藻类等浮游植物采用计数的方法测定误差较大，耗时费力，对检测人员的工作经验要求相对较高，一般可测定水中的叶绿素a含量代替藻类测定。当水中的叶绿素a含量突然增高，而且水中含有大量氮、磷等营养物质，加上阳光照射强烈，气候炎热等因素，该水域极有可能发生藻类疯长，可通知各有关部门尽早采取应对措施。

因为藻类是一类含叶绿素的、光合自养的、无胚的原植体植物，在浮游藻类里叶绿素a的含量大约占有机物比重的1～2%，是估算藻类生物量的较好指标。可预先测定藻类计数和叶绿素含量的相关关系，以叶绿素a的含量来推算藻类的数量，即通过测定水中的叶绿素来快速了解藻类的大致数量。

测定叶绿素a的仪器和方法有许多种，分光光度法测定叶绿素a是一简便易行的测定方法，水样经离心或过滤浓缩、研磨、丙酮提取后，定容，取上清液分别测量750nm、645nm、663nm、652nm等几个波长下的吸光度值，根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。

分光光度法测定叶绿素a，与测定其他物质稍有不同，如：测磷只需测定单一波长的吸光度值，再以该吸光度值代入由标准溶液测得的校准曲线计算含磷量。而叶绿素a无法使用校准曲线，需用几个波长下的吸光度值，根据经验公式来分别计算出各项指标的含量。因为叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b等物质组成，试液是多组分的混合溶液，在试液中分离这几类物质的难度较大，且无必要。叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收，在645nm处吸光系数较小，为16.75，在663nm 处较大，为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收，但在645nm处吸光系数较大，为45.60，在663nm 处较小，为9.27。由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处，该吸收曲线延伸到645nm处，在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大，因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时，需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值，再进行计算。

标准分析方法要求，叶绿体色素提取液不可浑浊，在710nm或750nm波长下测量吸光度，其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％，否则应重新过滤。假定样品在663nm处的吸光度值为0.03，则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015，对试液的清澈程度要求很高，测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰，一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm，为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值，故将测量浑浊度的波长选在710nm以上。在计算公式中，凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值，以扣除悬浮物质的干扰。

采用分光光度法测定叶绿素含量，对测量仪器分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素a的测定误差为2％，叶绿素b为19％，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和b来校正。

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