1、稀释平板法分离培养:取1克土壤放入灭菌的试管中,加入9毫升无菌水,充分混匀;取出1毫升稀释液,加入另一只乘有9毫升无菌水的试管中,充分混匀;再取出1毫升稀释液,加入另一只乘有9毫升无菌水的试管中,充分混匀;依次类推,分别稀释1百倍、1千倍、1万倍。从不同稀释倍数的稀释液中分别取0.1毫升,涂布与细菌培养基平板上(如LB固体培养基),放在65℃的培养箱中培养1-5天,直到有明显的单菌落长出为止。
2、菌种纯化:等有明显的单菌落生长出来后,将不同形态的单菌落,划线分离纯化,在相同的培养条件下,获得纯化的耐热菌。将这些耐热菌转接在新鲜培养基上,在30℃培养,不能生长或生长非常缓慢的可以视为嗜热菌。
3、菌种鉴定:提取细菌(一般分离出的嗜热菌都是细菌)的基因组DNA,PCR扩增其16S rDNA,送公司测序,测序结果与GenBank数据库中已知序列比对,即可获得种属信息。如果再详细鉴定,还要做生理生化试验,并与模式菌株进行比较。
可以配置蛋白培养基,放于高温下处理,用接种器蘸取,涂在培养皿上,高温下保存至有菌落形成,选取较大较完整菌落,再次接种至新培养基中筛选。既然是耐热菌,保持高温培养即可达到筛选的目的