1温度：温度影响分子的活动速度，20-40度是温度越高，结合越快，超过56度抗原抗体就会失活。2抗原抗体的相对浓度：比例合适结合越好。否则会出现前、后带现象。3金属离子;许多抗原抗体的反映需要金属离子参加。
