PCR技术里面用到的引物,在生物体内细胞分裂的DNA复制的时候,是不是也存在? 是用什么替代的?还是不用的

RT
2025-01-05 13:06:11
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回答1:

PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准(常以信息链为基准),5′端引物与位于待扩增片段5′端上游的一小段DNA序列相同;3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。
DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA(需要引物DNA or RNA),因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链(可以是RNA-DNA)才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的。而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成。两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物。
PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸;而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了。

回答2:

引物的作用是提供一个游离的3‘-OH,DNA复制过程需要引物参与。原核生物DNA合酶不能直接开始DNA的合成,需要引物酶先合成一段RNA引物,复制开始后再把引物切除。

回答3:

不存在!也没有替代,因为两者复制的方式和规模完全不同。
生物体中DNA的复制是一种“半保留复制”的机制,是基因组为单位的复制,长达上百MB
而PCR中利用引物扩增的是一段DNA,最长不过几十KB