首先需要明确蛋白质沉淀、变性。
只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性,低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构(氢键)破坏而沉淀析出,类似于盐析。发生沉淀的蛋白在合适的条件下会重新溶解(如溶于稀酸或稀碱),蛋白质仍有活性。
变性的蛋白质是不会再溶解了,因为变性即意味着结构的永久改变,蛋白失去活性了。
1.有机溶剂助沉法 + 等电点法沉淀蛋白.
1号试管内乙醇终浓度为32%,不能使蛋白变性,只能使蛋白沉淀,同时卵清蛋白的等电点pI是4.6-4.7,蛋白质在等电点时产生沉淀。
2.乙醇改变蛋白质的亲水结构导致沉淀,而加入0.1M NaOH后,使溶液pH远离蛋白质等电点(稀碱),在碱性条件下蛋白质重新溶解。
加入NaOH后溶液为碱性,故加入甲基红后为黄色;
加入1M 醋酸后(远高于0.1M的NaOH),使pH降低,醋酸/醋酸盐缓冲溶液的pH=pka =4.757,接近卵清蛋白的等电点,故蛋白会重新沉淀(等电点沉淀),此时溶液为酸性,故甲基红显示红色。甲基红是pH指示剂,变色范围是pH4.2(红)--6.2(黄)。