抗生素抗性标记基因:标记基因是与外源目的基因构建在同一表达载体上,一起转化进入细胞,而后在特定条件下帮助筛选出已转化的细胞。
目前应用的有抗生素抗性标记基因和除草剂抗性标记基因等。其中抗生素抗性标记基因应用的最为广泛。
标记基因可能产生的不安全因素包括两个方面:
一是标记基因的表达产物是否有毒或有过敏性,以及表达产物进入肠道内是否继续保持稳定的催化活性。由于对标记基因表达产物的结构和功能了解的比较详细,因此一般不存在毒性和过敏性,在正常的肠道环境下,这类蛋白也很易分解,不会继续保留催化活性。
第二个不安全因素在于基因的水平转移。由于微生物之间可能会通过转导、转化或接合等形式,进行基因水平转移。因此,在构建转基因微生物时,要求不能使用目前治疗中有效的抗生素的抗性基因做标记基因,并应修饰载体,以减少基因转移至其他微生物的可能性,同时提倡发展无标记基因技术,以减少标记基因可能带来的危害。
现在常用的用于大肠杆菌筛选系统的抗生素及工作浓度:
卡那霉素(50mg/L)
氨苄青霉素(50mg/L)
羧苄青霉素钠(50mg/L)
头孢霉素(50~100mg/L)
四环素(50mg/L)
常用的就这些,尤其有前三者为常用。
我只用过卡那和氨苄,而且也是实验室用的,工业化不知道。