TRIzol法提取RNA如何避免DNA污染

2025-01-18 11:47:01
推荐回答(4个)
回答1:

植物RNA本来就比价难提取,TRIzol提取时裂解要充分 剧烈震荡,分层静置,离心之后自然就分为两层,取RNA层的时候吸取一定要小心,吸得时候一定要缓慢,不要怕浪费,有的人吸得很多,很怕浪费,结果就吸到了中间层和下层,个人觉得吸取80%最多了,再多就很容易吸到杂质了,操作要小心,动作快速准却,这样才能提到高质量的RNA

回答2:

除了上楼的方法——一般操作都需要那样进行的。

还有,如果你对rna质量要求很高的话,可以用dna酶去除dna污染。不过有可能导致rna的部分降解。或者也可以纯化rna,这些步骤都可以避免dna污染。
不过dna酶慎用!

回答3:

我也是类似问题,RNA用TAQ酶扩出片段。。。闷
可以在RT前用DNASE1处理~
方法:RNA(1ug)+BUFFER(1ul)+water(to9ul)+DNASE(1ul) 37度30分
+ 25mM EDTA 60度 10分钟
然后不换管直接在里面加RT的东西 最后定容到20ul 上PCR

回答4:

1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少;
2,使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇/异丙醇等)、高纯度的Buffer、碱性溶剂等;
3,如果提取的RNA中含有DNA时,也可以使用DNase I进行DNA消化。